NBT assayprotokoller

NBT eller nitro blue tetrazolium er en kemisk forbindelse, der anvendes i biokemi og immunologi til påvisning af enzymet basisk phosphatase. Stoffet anvendes også ved diagnose test af kronisk granulomatøs sygdom, som påvirker immunodefense celler. NBT assayprotokoller inkluderer immunoblotting, BCIP / NBT alkalisk fosfatasesubstratopløsning og detektion af galactosidase og alkalisk fosfatase aktiviteter i væv.

Immunoblotting

Immunoblotting er en teknik, der anvendes til påvisning af antistoffer, som er proteiner involveret i immunodefense proces, siger Susan R. Haynes i "RNA-protein-interaktion protokoller." Dette omfatter også anvendelsen af ​​NBT samt bovint serumalbumin, primære antistoffer 9E10, Comassie farveopløsning, nitrocellulosemembraner, Tris-base buffer opløsning, ammonium per-sulfat, natriumdodecylsulfat og vandmættet buthanol.

BCIP / NBT Alkaline phosphatasesubstratopløsning

Teknikere fremstille en opløsning med tre dråber 1 per cent 5-brom-4-chlor-3-indolyl-phosphat (BCIP), tre dråber 1,5 pct NBT, to dråber af det kemiske stof Levamisol og alkalisk phosphatase (AP) puffer ved pH 9,5, ifølge IHC Verden hjemmeside. Opløsningen inkuberes derefter ved stuetemperatur og tilgængelig til brug.

Påvisning af galactosidase og alkalisk fosfatase Aktiviteter i Tissue

Galactosidaser er enzymer, der kan bryde den galactosid molekyle til stede i bakterierne Escherichia coli og andre organismer. Ifølge protokol Online, i løbet af denne protokol, biologer bruger rotte celleprøver behandlet med PBS-opløsning, glutaraldehyd og paraformaldyde. Derefter kan de forberede brom-chlor-indolyl-galactopyranosid eller X-gal reaktionsbuffer for prøverne, ved hjælp af kaliumferrocyanid, magnesiumchlorid, natriumdeoxycholat og detergent Nonidet P-40. Teknikere kan bruge nitro blå tetrazolium (NBT) i stedet for kaliumferrocyanid som et hurtigere alternativ. Celleprøver er senere observeret under mikroskop.