Sådan Beregn antistofkoncentration

En af de mest almindelige metoder til beregning af et protein-koncentration i et laboratorium indstilling er at bruge en Bradford analysen. Bradford reagens er et kolorimetrisk reagens, som skifter farve baseret på proteinkoncentration. Ved at kombinere en kendt standard kurve med Bradford reagens, kan du oprette en retsakt, der kan du beregne koncentrationen af ​​ethvert protein, herunder antistoffer.

Instruktioner

Opret en Standard

• Mål 200 mg BSA om vejepapir hjælp af en laboratorieskala. Vedlæg det i et mikrocentrifugerør. Tilføj 2 ml buffer til mikrocentrifugerør indeholdende 200 mg BSA. Mærk dette rør "1"

• Vortex Tube 1 indtil BSA er helt opløst.

• Fjern 500 ul af BSA i buffer og overføre det til et andet rør. Mærk dette rør "2." Tilsæt 500 ul af almindelig buffer til Tube 2.

• Fjern 200 ul af BSA i buffer fra Glas 1 og overføre det til et nyt rør. Mærk dette rør "3." Tilføj 800 ul af almindelig buffer til Tube 3.

• Fjern 100 ul af BSA i buffer fra Glas 1 og overføre det til et nyt rør. Mærk dette rør "4." Tilføj 900 ul almindeligt buffer til Tube 4.

• Fjern 10 ul af BSA i buffer fra Glas 1 og overføre det til et nyt rør. Mærk dette rør "5." Tilføj 990 ul af almindelig buffer til Tube 5. Rør 1- 5 omfatter en gradueret standard serie. Det første rør har en kendt koncentration af 100 mg / ml; den anden 50 mg / ml; den tredje, 20 mg / ml, den fjerde, 10 mg / ml; og det femte 1 mg / ml. Hvert rør indeholder ca. 1 ml opløsning.

Opret antistoffortyndinger

• Tilsæt 5 0ul oprenset antistof til 95 0ul buffer. Mærk dette rør "A."

• tilsættes 10 ul af oprenset antistof til 990 ul buffer. Mærk dette rør "B."

• Tilsæt 2 ul af oprenset antistof til 998 ul buffer. Mærk dette rør "C."

Indlæse pladen

• Placer 0,5 ml almindelig buffer i de første brønde i to kolonner af flerbrøndspladen.

• Placer 0,5 ml af indholdet af Tube 1 i den anden brønd i de to første kolonner i flerbrøndspladen. Fortsæt ned ad gradueret række, indtil de to første kolonner indeholder 0,5 ml en BSA standard opløsning fra hvert af rørene 1-5, herunder brønde til almindelig buffer.

• Tilføj 0,5 ml af Bradford-reagens til hver brønd. Pladen rundt for at blande reagenset med proteinholdige opløsninger, og pas på ikke at spilde indholdet af nogen af ​​brøndene. Vent 5 minutter.

• Læs pladen ifølge protokollen specifikt til din plade læser ved en bølgelængde på 595 nm.

Beregn antistofkoncentration

• Kopier værdier læses fra pladen læseren ind Microsoft Excel.

• Opret en graf fra de to kolonner af værdier som repræsenterer BSA standard ved hjælp af Guiden diagram i Microsoft Excel.

• Plot punkter målt fra antistoffortyndinger i Excel-graf. Læse den tilsvarende koncentration af protein i forhold til værdien af ​​y-aksen for antistoffortyndingen punkt på Excel grafen.

4. Afhængigt af om du bruger de værdier, der er opnået fra Tube A, B eller C, multipliceres værdien med enten 20, 40 eller 500, hhv. Den resulterende værdi er den koncentration af dit oprenset antistof.