Sådan Test Koncentrationen af ​​amylaseenzymer

Amylaseenzymer produceres i bugspytkirtlen og i spyt kirtler og hjælpe fordøje og behandle kulhydrater. Når bugspytkirtlen bliver syge, er amylase frigives i blodstrømmen. Når en patient oplever fordøjelseskanalen problemer eller der er sygdom i bugspytkirtlen, vil en læge bestille en blodprøve for at fastslå omfanget af amylase i blodet. Overvågningen af ​​amylase enzymniveauer vil give meget information om sygdommens progression og virkningerne af behandlingen.

Instruktioner

Fremstilling af stivelse standardkurve

•  Tænd for spektrofotometer og sæt den til en bølgelængde på 620 nm. Lad instrumentet varme op i mindst 10 minutter, så den bliver stabil under eksperimentet.

•  Set ud seks reagensglas, mærke dem 1-6 og placere dem i et reagensglas rack. Arranger opløsninger af stivelse, deioniseret vand og KI / jodopløsning på bænken toppen.

•  Fyld røret 1 med 3 ml deioniseret vand under anvendelse af en pipette; dette vil tjene som blank. Fyld rørene 2-6 med 3,0 ml, 2,9 ml, 2,7 ml, 2,4 ml og 2,1 ml deioniseret vand hhv. Tilføj stivelse opløsning til hver af rørene 2-6 i følgende rækkefølge: rør 2 får 0ml, rør 3 får 0,1 ml, rør 4 får 0,3 ml, rør 5 får 0,6 ml og rør 6 får 0,9 ml.

•  Tilsæt en dråbe KI / jod-opløsning til hver af de seks rør. Bland forsigtigt hvert rør grundigt før optagelse deres absorbans i spektrofotometer.

•  Fyld kuvetten med blindprøven, rengøre ydersiden af ​​kuvetten og placere den i det tomme hul i spektrofotometer. Juster absorbans på nul. Alle andre løsninger vil give en positiv absorbans.

•  Fyld prøvekuvetten med hver af de andre fem opløsninger i sving. Tør ydersiden af ​​kuvetten før hver måling. Optag absorbansværdien for hvert rør. Skyl kuvetten med den nye løsning mindst én gang før påfyldning til testen.

•  Lav en graf, der plotter absorbanslæsninger mod koncentration stivelse. Dette er standard kurve, der giver dig mulighed for at bestemme koncentrationen af ​​en opløsning, der har en given absorbans læsning.

Bestemmelse Amylase Koncentration

•  Rens alle reagensglassene fra den første del af testen. Behold den tomme rør til brug senere.

•  Opnå en blodprøve fra patienten. Prøven anbringes i en centrifuge og adskille de røde blodlegemer fra blodplasmaet.

•  Fyld et reagensglas med 9 ml deioniseret vand og 1 ml af blodplasma. Dette er en 1:10 fortynding af plasma. Bland røret grundigt og pipette 1 ml af opløsningen i et andet reagensglas. Mærk de to rør med deres indhold.

•  Forbered dig på at udføre en tidsindstillet test. Har et stopur handy og oprette syv reagensglas med kuvetter i reagensglas rack. Du vil tage aflæsninger hvert andet minut, når testen starter. Optag nøjagtige tidspunkt og absorbansaflæsning for hver af de syv datapunkter. Fyld hver af de syv reagensglas med 2 ml deioniseret vand.

•  Tilføj 9ml stivelsesopløsning til reagensglasset, der har 1 ml af 1:10 fortynding af plasma. Så snart du begynder at tilføje stivelsesopløsningen, starter stopuret. Bland reagensglasset godt og pipette 1 ml af stivelse / plasma opløsning ind i den første af de syv reagensglas. Registrere den tid. Tilsæt 1 dråbe KI / jod løsning på reagensglasset og blandes.

•  Overførsel til kuvetten Tør ydersiden og registrere absorbans. Gentag processen med de resterende seks reagensglas på to minutter intervaller. Ved afslutningen af ​​den tidsindstillede test bør du have aflæsninger for den faktiske tid og absorbans for den tid spænd på 0, 2, 4, 6, 8, 10 og 12 minutter.

•  Brug standardkurven for at finde den koncentration af stivelse til hver af de syv datapunkter. Disse punkter vil være faldende med tiden. Den amylase fordøjer stivelsen og over tid forbruger al stivelsen rådighed.

•  Tegn de datapunkter for den tidsindstillede test som koncentration stivelse mod tiden. Hældningen af ​​denne kurve angiver mængden af ​​amylase i plasmaprøven.