Hvorfor bruge buffere i HPLC?

Højtryksvæskekromatografi (HPLC) er en fælles middel af instrumentel kemisk analyse. Et afgørende element i enhver HPLC metode er den særlige mobile fase opløsningsmiddel, der anvendes til at opløse og transportere analyt kemikalier. Mange mobile faser bufferet til at styre ændringer i pH og sikre, at testmetoden producerer nøjagtige og præcise resultater.

Buffere

En buffer er en specielt formuleret opløsningsmiddelopløsning, der udviser kun små ændringer i pH, når stærke syrer eller baser tilsættes til det. Puffere fremstilles ved at opløse en svag base og dens korresponderende syre eller en svag syre og dens konjugerede base i et opløsningsmiddel. Når syrer eller baser tilsættes til en buffer, syre-base-ligevægt allerede findes i opløsningen kompenserer automatisk for tilsætning, med det resultat, at der er relativt lille ændring i opløsningens pH-værdi.

Buffer og Ioniserbare kemiske stoffer

HPLC kan anvendes til at analysere ioniserbare kemiske forbindelser. Disse er forbindelser, som let kan danne ioner i opløsning, såsom carboxylsyrer. Generelt bør sådanne forbindelser analyseres i deres ikke-ioniseret tilstand, hvor de vil udvise konsekvent adfærd i form af deres opløselighed og interaktioner med HPLC-søjle emballage. Buffere tillader den mobile fase pH at være "låst fast" til en vis bestemt område, hvor arten af ​​interesse er kendt for at være i sin ikke-ioniseret tilstand. Samt buffere modstå lokale ændringer i pH forårsaget af forbindelserne selv.

General Buffer Brug

Buffere skal anvendes, når en ioniserbar art er analysanden. Disse omfatter organiske syrer, såsom sorbinsyre og benzoesyre. Organiske baser, der indeholder amin-funktionelle grupper skal også analyseres ved hjælp af bufret mobile faser. Eksempler på sådanne organiske baser omfatter nikotin og methamfetamin. Bufret mobil faser kan også bruges, når man analyserer ikke-ioniserbare forbindelser for at tvinge forureninger ind i enten deres ioniseret eller ikke-ioniseret form som kræves for at sikre, at de ikke griber ind i analysen af ​​de arter af interesse.

Fælles buffered mobilfaser

Generelt bør syren dissociationskonstant, pKa, af de heri arter være tæt på pH ønskes til bufferen. Samt, skal den mobile fase typisk være mindst halvdelen vand til brug med uorganiske puffermidler arter. For lave pH-værdier i nærheden af ​​2 til 3, den mest almindelige puffer består af natrium- eller kaliumsalte af phosphorsyre. Hvis en flygtig buffer er påkrævet, kan anvendes acetat eller formiat. Et typisk område for koncentration buffer art er fra 10 til 50 millimol per liter.