Mammalian Cell Lysis Protocols
Cellelysis er opbrydning af celler, medens forårsage så lidt skade på proteiner, organeller, DNA og andre makromolekyler som muligt. Cellelysis anvendes til en række celle- og molekylærbiologiske teknikker, herunder Western blotting, analyse af proteiner, Southern blotting og undersøgelse af DNA-sekvensen. Molekylet eller organel under undersøgelse vil bestemme den anvendte metode til at lysere cellen.
Mekanisk
Der er en række af mekaniske metoder til at lysere celler, herunder blendere, ultralyd og homogenisatorer. Denne metode er afhængig af vinger til at male og fortrænge de væv og celler. Det ofte anvendes til celler, der er vanskelige at lysere, såsom mikroorganismer. Komplekse væv, såsom lever eller nyre, kan imidlertid kræve mekanisk lysis. Mekanisk lysis ofte resulterer i en viskøs opløsning, der er svært at præcisere. Den varme, der genereres kan denaturere proteiner af interesse.
Buffere
Rengøringsmidler ofte anvendes til at lysere pattedyrceller. Denne metode er mildere ved at forstyrre cellernes membraner. Den valgte vil afhænge af, hvilke teknikker cellelysatet er detergent, der skal anvendes, og de celler, der skal lyseres. Cellerne og buffere ofte holdes koldt, hvis du studerer proteiner for at forhindre deres denaturering. Andre overvejelser er pH og saltkoncentrationer, og hvis inhibitorer er nødvendige for at forhindre denaturering af proteiner.
Frys Tø
Celler kan fryses og optøs og over flere cyklusser, vil cellen lyserer. Denne metode bevirker cellen til at svulme op og iskrystaller dannes, hvilket bevirker cellemembranen til at bryde og frigive cellens indhold. En undersøgelse af Haifeng Yu og kolleger for Bio-Rad, i 2006, viste, at tilsætningen af en fryse-tø-cyklus med lydbehandling i mammale celletyper, forbedret følsomhed for nogle proteiner i forhold til blot sonikering.
Flydende Homogenisering
Celler tvinges gennem en snæver plads, som nedbryder cellemembranen. En række forskellige typer af homogenisatorer er til rådighed, selv om udstyret kan være dyrt. Det antal gange, at cellerne har til at passere gennem afhænger cellerne og udstyr, der anvendes. Udbytte kan imidlertid være variabel.